Aislamiento de ácidos nucleicos para el diagnóstico veterinario
Los veterinarios utilizan una variedad de herramientas para diagnosticar enfermedades, controlar la progresión de la enfermedad o la respuesta a la terapia, y examinar a animales aparentemente sanos para detectar la presencia de enfermedades subyacentes. Muchos de estos métodos se basan en técnicas de detección de biología molecular como qPCR o secuenciación. MACHEREY-NAGEL ha desarrollado, por lo tanto, productos específicos para la extracción de ácidos nucleicos patógenos como ARN/ADN viral o ADN bacteriano. Estos kits de extracción de ADN/ARN son adecuados para prácticamente todas las muestras veterinarias, proporcionan ácidos nucleicos de alta calidad con excelente pureza, y están disponibles en formatos manuales o automatización:
NucleoSpin VET - extracción de muestras basada en membrana de sílice
El NucleoSpin VET es un kit de membrana de sílice de un solo centrifugado para el aislamiento de ARN/ADN viral y ADN de bacterias de diversos especímenes de muestras veterinarias, como suero, plasma, fluidos biológicos libres de células, sangre entera de animales, tejido, hisopos, leche y heces. La versátil gama de aplicaciones aporta máxima flexibilidad a su rutina diaria de laboratorio automatización y permite el procesamiento de una amplia variedad de materiales de muestra utilizando el mismo protocolo estándar después de la preparación de muestras.
- Extracción de ARN/ADN viral y ADN de bacterias libre de inhibidores
- Máxima flexibilidad para varios tipos de muestras veterinarias
- Mismo protocolo estándar para todas las matrices de especímenes después de la preparación de muestras
- Protocolo de vía rápida de 20 minutos para pruebas de rutina rápidas de matrices de muestras de baja complejidad
Recuperación fiable de ADN y ARN viral con el kit NucleoSpin VET a partir de sangre bovina
El kit NucleoSpin VET se utilizó para el aislamiento de ADN y ARN viral de sangre EDTA bovina con diversas cargas virales. La sangre bovina descongelada se inoculó con LSDV (virus de la enfermedad de la piel nodular; virus de ADN), BoCoV y FMDV (virus corona bovino, virus de la fiebre aftosa; virus de ARN) a varios niveles de dilución. Las muestras se purificaron utilizando el kit NucleoSpin VET siguiendo el procedimiento estándar del protocolo y los elutados se analizaron posteriormente mediante RT-qPCR utilizando reactivos AgPath-IDTM One-Step RT-PCR (ThermoFisher Scientific). El kit NucleoSpin VET muestra una recuperación consistente y fiable de ARN y ADN viral de muestras con títulos virales altos y bajos (el título de FMDV en una dilución de 1:10000 estuvo por debajo del límite de detección). Fuente: Folleto de producto NucleoSpin VET; datos amablemente proporcionados por Hanna Keck y Michael Eschbaumer, Instituto Federal de Investigación para la Salud Animal de Alemania.
Detección por RT-qPCR del virus de la fiebre aftosa en leche bovina y lesiones cutáneas
Para comparar la extracción manual y la automatización, se utilizaron el kit NucleoSpin VET y el kit NucleoMag VET para aislar ARN viral de muestras positivas para FMDV (virus de la fiebre aftosa). Las muestras fueron sometidas a purificación utilizando el kit NucleoSpin VET siguiendo el procedimiento estándar y en paralelo con el kit NucleoMag® VET basado en partículas magnéticas (entrada de muestra de 100 µL). Los elutados se analizaron posteriormente mediante RT-qPCR utilizando reactivos AgPath-IDTM OneStep RT-PCR (ThermoFisher Scientific). Los resultados muestran que ambos kits rindieron de manera comparable, incluso con muestras difíciles como leche muy grasa o lesiones cutáneas. Fuente: Folleto de producto NucleoSpin VET; datos amablemente proporcionados por Hanna Keck y Michael Eschbaumer, Friedrich-Loeffler-Institut, Instituto Federal de Investigación para la Salud Animal de Alemania.
NucleoMag VET - extracción de muestras basada en partículas magnéticas
El NucleoMag VET es un kit basado en partículas magnéticas para la extracción manual o automatización de ARN/ADN viral y ADN bacteriano de muestras veterinarias como suero, plasma, fluidos biológicos libres de células, sangre entera animal, tejido, hisopos, leche y heces. Después del tratamiento de la muestra, las muestras pueden procesarse con el protocolo de purificación estándar.
- Extracción de ARN/ADN viral e ADN bacteriano libre de inhibidores
- Máxima flexibilidad para diversos tipos de muestras veterinarias
- Mismo protocolo estándar para todas las matrices de muestras después de la preparación de muestras
- Fácil de automatización en sistemas de varillas magnéticas o manipuladores líquidos - Contact us para asistencia
Detección fiable de BTV, CSFV, PCV 2 y SBV tras el aislamiento de ADN o ARN utilizando el kit NucleoMag VET
El kit NucleoMag VET se utilizó para extraer ácidos nucleicos virales de sangre bovina (A), sangre porcina (B), tejido porcino (c) o suero bovino (d). Posteriormente, se realizó un análisis de qPCR para determinar la carga de títulos virales en los materiales de muestra: (A) BTV (virus de la lengua azul); (B) CSFV (virus de la fiebre clásica porcina) (C) PCV 2 (circovirus porcino tipo 2); (D) SBV (virus de Schmallenberg). Se comparó el rendimiento de la extracción con otros kits comerciales de extracción de ácidos nucleicos disponibles para el aislamiento de ARN y/o ADN viral. Los datos de qRT-PCR muestran que la concentración de ADN o ARN varía según el kit de extracción utilizado, lo que resulta en una detección disímil de BTV, CSFV, PCV 2 y SBV. Para la detección de los diversos virus en los diferentes materiales de muestra, se demuestra que la concentración de ADN o ARN fue siempre alta utilizando el NucleoMag VET en comparación con los otros kits. Los valores de Ct obtenidos para los ácidos nucleicos virales y los materiales de muestra muestran que el kit NucleoMag VET es un kit de extracción muy consistente y fiable, obteniendo valores de Ct bajos para una detección fiable de virus independientemente del tipo de virus o del material de muestra. Fuente: Nota de aplicación NucleoMag VET en KingFisher; los datos fueron amablemente proporcionados por el Dr. Hoffmann, Friedrich-Loeffler-Institut, Alemania.
Se puede encontrar más información sobre los datos de aplicación para el kit NucleoMag VET a través de las referencias científicas en la lista de bibliografía o en las notas de aplicación a continuación!
Citado en más de 100 publicaciones revisadas por pares!
El NucleoMag VET ha sido citado en más de 100 publicaciones revisadas por pares. El kit, basado en partículas magnéticas, se ha utilizado en investigación y diagnóstico molecular para una variedad de patógenos relevantes para la medicina veterinaria. Haga clic aquí para ver la lista de referencias completa:
- Virus de la fiebre porcina africana/clásica
- Virus de la enfermedad de la piel linfoedematosa
- Virus de los pequeños rumiantes
- Virus de la influenza A
- Virus de la fiebre aftosa
- Virus de Schmallenberg
¡Extracción automatizada de muestras, fácil!
¿Está planeando automatizar su preparación de muestras? Los especialistas en automatización de MACHEREY-NAGEL pueden apoyarle en la implementación del kit NucleoMag VET en su plataforma robótica. Contáctenos para obtener apoyo o scripts gratuitos y listos para usar, p. ej. para instrumentos KingFisher u otras plataformas de manipuladores líquidos y varillas magnéticas:
Correo electrónico: bio-tech@mn-net.com I Tel.: +49 24 21 969 270