Kits NucleoBond Xtra para plásmidos - rápidos, limpios y fiables

Una gama cada vez mayor de aplicaciones bioquímicas requiere cantidades medias a grandes de ADN de plásmido libre de contaminación con sales y componentes bacterianos residuales. Utilizando NucleoBond Xtra Maxi, se pueden obtener rendimientos de hasta 1000 μg de ADN de plásmido ultrapuro basándose en una cromatografía de intercambio aniónico fiable y bien establecida. Los kits NucleoBond Xtra Maxi contienen columnas ampliadas, lo que conduce a camas de resina de intercambio aniónico de sílice más bajas. Esto, a su vez, permite un flujo más rápido del lisado y los tampones a través de las columnas. Se incluyen filtros de columna especialmente diseñados para una clarificación práctica y que ahorra tiempo de los lisados bacterianos. Los filtros de columna se suministran insertados en las Columnas NucleoBond Xtra y permiten la clarificación paralela del lisado bacteriano y la carga en la columna. Su gran superficie estructurada conduce a altas velocidades de filtración y un riesgo mínimo de obstrucción.

Las siguientes características hacen que NucleoBond Xtra Midi sea ideal para la purificación de plásmidos:

• Tecnología de cromatografía de intercambio aniónico probada para obtener los máximos rendimientos y calidad,

• Diseño de columna optimizado para minimizar el riesgo de obstrucciones,

• Procedimiento acelerado con NucleoSpin Finalizer para una preparación completa en aproximadamente 30 min.

Procedimiento NucleoBond Xtra Midi

Las células de bacterias transformadas (que contienen plásmido) se lisan mediante un conjunto optimizado de tampónes. Después de la equilibración de la Columna NucleoBond Xtra y el Filtro de Columna NucleoBond Xtra, todo el lisado se carga por flujo gravitacional y se aclara simultáneamente mediante el Filtro de Columna NucleoBond Xtra. El ADN plasmídico se une a la Resina de Sílice NucleoBond Xtra. Después de pasos de lavado eficientes, el ADN plasmídico se aísla y se desala, se precipita y se disuelve fácilmente en cualquier tampón adecuado (p. ej., tampón de baja salinidad o agua) para su uso posterior. La precipitación se puede realizar por centrifugación utilizando el NucleoSpin Finisher para reducir el tiempo total de preparación a unos 30 minutos o mediante perlas de desalinización NucleoMag.

NucleoBond Xtra resina de intercambio aniónico

NucleoBond Xtra es una basada en patentada, desarrollada por MACHEREY-NAGEL. Consiste en perlas de sílice macroporosas e hidrófilas funcionalizadas con MAE (metil-amino-etanol). El recubrimiento denso de este grupo funcional proporciona una alta densidad de carga positiva general en condiciones de pH ácido, lo que permite que la columna vertebral de fosfato cargada negativamente del de plásmidos se una con alta especificidad. El de plásmidos es adecuado para su uso en las aplicaciones de más exigentes, incluyendo la transcripción in vitro y la .

Rendimientos probados elevados y tiempo de preparación corto

Mayores rendimientos en comparación con los datos de QIAGEN en www.qiagen.com

Comparación: A) Kits que incluyen filtro de jeringa para desalinización, B) Kits sin filtro de jeringa para desalinización

Menor tiempo de preparación en comparación con los datos de QIAGEN en www.qiagen.com

Comparación: A) Kits que incluyen filtro de jeringa para desalinización, B) Kits sin filtro de jeringa para desalinización

LyseControl - para los máximos rendimientos

LyseControl es un reactivo azul, premezclado para su práctico uso con el tampón de lisis LYS. Al añadir tampón de lisis a las células resuspensas, la suspensión celular se vuelve azul (Figura 2A). La solución azul se invierte suavemente 5 veces y se incuba durante 5 min para evitar la contaminación con ADN genómico. Al añadir tampón para neutralizar el lisado, LyseControl se vuelve incoloro (Figura 2C). Trazas de LyseControl azul (Figura 2B) indican una mezcla insuficiente. Este paso elimina SDS, renatura el ADN de plásmidos y precipita proteínas y ADN genómico. Por lo tanto, previene la obstrucción del filtro, maximiza el rendimiento de ADN de plásmidos y minimiza la contaminación.

Publicaciones seleccionadas

Gieselmann et al. Aislamiento de alta eficiencia de anticuerpos humanos totalmente humanos que se dirigen a patógenos infecciosos. Nature Protocols 16, 3639-3671(2021).

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